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以下是天津本生牛白細胞介素10(IL-10)ELISA試劑盒的實驗說明書核心內(nèi)容整理,綜合多個來源信息:
檢測原理?
采用雙抗體夾心法(ELISA):
預(yù)包被抗牛IL-10抗體的微孔板捕獲樣本中的目標蛋白。
加入HRP標記的檢測抗體形成復(fù)合物,TMB顯色(藍色→黃色)。
通過450nm波長測定OD值,計算濃度。
樣本處理要求?
類型?:血清、血漿、細胞上清液、組織勻漿。
處理方法?:
血清/血漿?:3000轉(zhuǎn)離心10-30分鐘分離,避免溶血或高脂血。
組織勻漿?:生理鹽水搗碎后離心取上清。
保存?:分裝后-20℃凍存,避免反復(fù)凍融。
試劑盒組成?
組分 規(guī)格/數(shù)量 備注
預(yù)包被微孔板 12孔×8條 可拆卸
標準品 0.5ml(濃度梯度) 需稀釋
HRP標記抗體 6ml 避光保存
TMB顯色液 A液+B液各6ml 現(xiàn)配現(xiàn)用
終止液 6ml 酸性溶液
濃縮洗滌液 20ml(30倍稀釋) 使用前稀釋
操作步驟?
平衡試劑?:室溫放置15-30分鐘。
標準品稀釋?:按說明書梯度稀釋(如40ng/L→20ng/L→10ng/L)。
加樣與孵育?:
加入標準品或樣本(100μl/孔),37℃孵育60分鐘。
洗滌?:手工或自動洗板5次。
顯色與終止?:
加入TMB避光反應(yīng)15分鐘,終止后立即檢測OD值。
注意事項?
靈敏度與范圍?:典型檢測范圍15.6-1000 pg/mL,靈敏度因品牌差異。
交叉反應(yīng)?:與牛IL-10類似物無顯著交叉。
保存條件?:未開封試劑盒2-8℃保存,開封后板條需密封防潮。
禁止檢測?:含NaN3的樣本(抑制HRP活性)。
數(shù)據(jù)計算?
以標準品OD值繪制曲線,擬合方程計算樣本濃度。
注:以上資料僅供參考,如需完整說明書,請參考試劑盒附帶文檔或聯(lián)系供應(yīng)商。
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